達(dá)氏鱘(Acipenser dabryanus Duméril, 1868)是我國(guó)長(zhǎng)江中上游特有魚(yú)類,受人類活動(dòng)影響其資源極度衰退,被列為國(guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物(1988),世界自然保護(hù)聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄(IUCN 紅色名錄)極危(CR)物種(2010)。所幸達(dá)氏鱘人工保種取得成功,全人工繁殖已經(jīng)實(shí)現(xiàn),增殖放流成為達(dá)氏鱘資源修復(fù)的重要手段。然而,在達(dá)氏鱘的資源管理和種群保護(hù)中,種群的遺傳多樣性,系譜關(guān)系,遺傳結(jié)構(gòu)等遺傳學(xué)方面的研究相對(duì)薄弱。由于達(dá)氏鱘野生親魚(yú)數(shù)量有限,人工繁殖時(shí)尚未進(jìn)行科學(xué)繁育搭配,多年累代養(yǎng)殖后可能出現(xiàn)不同程度的近親繁殖,從而導(dǎo)致達(dá)氏鱘保種群體遺傳結(jié)構(gòu)破壞,種質(zhì)退化。為減少近親繁殖導(dǎo)致的遺傳問(wèn)題,保護(hù)這一瀕危物種不至于滅絕,迫切需要利用科學(xué)可靠的分子標(biāo)記對(duì)達(dá)氏鱘養(yǎng)殖個(gè)體進(jìn)行親子鑒定,進(jìn)而有效指導(dǎo)達(dá)氏鱘規(guī)模化繁育和資源養(yǎng)護(hù)。
本研究以目前我國(guó)最大一批達(dá)氏鱘人工保種群體(來(lái)源于宜賓珍稀水陸生動(dòng)物研究所和中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所)為研究對(duì)象,應(yīng)用二代測(cè)序技術(shù)對(duì)達(dá)氏鱘基因組進(jìn)行測(cè)序,共獲得26136個(gè)達(dá)氏鱘微衛(wèi)星序列,從這些序列中選取二、三、四堿基重復(fù)次數(shù)在10次及以上,五、六堿基重復(fù)6次及以上的微衛(wèi)星序列共180個(gè),用軟件Primer Premier 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。以30尾人工繁殖個(gè)體和12尾野生個(gè)體的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳和全自動(dòng)毛細(xì)管電泳進(jìn)行多次篩選,最終獲得11個(gè)具有高度多態(tài)性并且能穩(wěn)定遺傳的微衛(wèi)星位點(diǎn),應(yīng)用相關(guān)的軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后顯示:11個(gè)微衛(wèi)星的等位基因數(shù)為7-13,平均每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)為9.18,期望雜合度(He)為0.67~0.88(平均值為0.82),Shannon~Wiener多樣性指數(shù)(SW)為1.46~2.22(平均值為1.92),多態(tài)性信息含量PIC值為0.72~0.86(平均值為0.79)。