近日，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所鰱鱔遺傳育種創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)申請(qǐng)的“一種3個(gè)gRNA聯(lián)用的高效鰱runx2b基因敲除方法及應(yīng)用”和“一種3個(gè)gRNA聯(lián)用的高效鰱bmp6基因敲除方法及應(yīng)用”獲國(guó)家發(fā)明專利授權(quán)，專利號(hào)分別為ZL 202410197232.4和ZL 202410197224.X。

基因編輯是一種通過(guò)插入、敲除、修飾或替換等方式對(duì)特定DNA片段進(jìn)行生物基因組的精確改造，對(duì)生物體中目標(biāo)基因進(jìn)行編輯的技術(shù)。然而，在鰱的基因功能和遺傳改良育種等方面的研究卻進(jìn)展緩慢，一直受制于有效基因編輯方法的缺乏，傳統(tǒng)的單一靶位點(diǎn)突變，打靶效率較低，容易造成無(wú)義突變。

針對(duì)傳統(tǒng)的單一靶點(diǎn)敲除打靶效率低等問(wèn)題，鰱鱔遺傳育種創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)一種使用3個(gè)gRNA聯(lián)用的高效鰱runx2b和bmp6基因敲除方法，將體外轉(zhuǎn)錄合成的三個(gè)靶基因gRNA與Cas9蛋白混合，通過(guò)顯微注射的方式導(dǎo)入鰱受精卵單細(xì)胞期的動(dòng)物極中，孵化后即可獲得靶基因突變的鰱F0代，并在F0代大幅破壞基因的表達(dá)，并觀察到少肌間刺的表型。該方法能高效實(shí)現(xiàn)鰱基因的敲除，為開(kāi)展鰱的育種和基因功能研究提供了有效的技術(shù)手段。